人ELISA試劑盒又稱ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等，自動(dòng)上世紀(jì)660年代問世以來(lái)，迅速得到了*科研工作者的認(rèn)同，并得到了廣泛地應(yīng)用，尤其是在生化領(lǐng)域中以及免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中，具有穩(wěn)定性高、操作簡(jiǎn)單、容易保存等優(yōu)勢(shì)。

　　一般來(lái)說(shuō)，人ELISA試劑盒可以采用兩種不同的方法進(jìn)行操作，分別是：雙抗體夾心法以及間接法，其中：

　　一、雙抗體夾心法

　　1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）

　　2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。

　　3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

　　4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

　　二、間接法

　　1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

　　2、次日洗滌3次；

　　3、加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；

　　4、（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；

　　5、37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

　　6、zui后一遍用DDW洗滌。

　　其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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